2  结果

    2.1  PCR扩增产物鉴定  以β-actin为DNA分子量标准参照，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，31例肺癌标本nm23阳性为12例提示其nm23基因表达。2.2  p53用SSCP分析  在31例肺腺癌病理标本中，在p53基因中第7、第8外显子分别存在泳动变位的例数是10例、5例，共10例提示其p53基因存在突变。nm23阳性率及p53基因突变率分别为38.7%及48.4%（见图1、2）。图1显示nm23表达情况，N为正常带，T为肿瘤标本。图2中，3、4、5带显示DNA泳动变位，提示这3例标本p53第8外显子有碱基改变。

    2.3  随访  31例均做随访，除1例失访按死亡计算外，随访率96.8%。Ⅰa期1例术后未做特殊治疗，余30例做术后方案为CAP、MVP、NP、GP 4周期的化疗。除1例术后8个月死于脑转移外，余30例均生存1年以上（见表1）。nm23表达阳性与p53突变与分期、病理分化程度和生存情况的关系（见表2）。虽病例较少，但nm53阳性表达者3年以上生存率较高，与1年生存者相比有统计学上的差异（P＜0.01）。也以早期肺癌表达较高。而p53外显子的突变却以分期较晚，病理分化较低，3年以内（含3年）生存者为多，与5年生存者的突变率相比也具有统计学上的差异（P＜0.01）。表1  分期与生存时间关系表2  PCR检测与临床资料关系

    3  讨论

    肿瘤转移是肿瘤患者主要死亡原因之一，肿瘤的发生和转移是两个相互关联又各自独立的生物学过程，转移可受自身的转移基因及转移抑制基因的调控［3，4］。肿瘤转移是一个复杂的过程，包括肿瘤细胞运动，浸润周围组织，穿透基膜，逃逸免疫反应并在远离原发部位增殖，形成转移灶。寻找在转移过程中起作用的基因，可指导对转移性肿瘤的诊断和治疗策略。为阐明肿瘤发生、发展是一个多基因、多阶段的遗传学改变过程，我们用PCR-SSCP检测了31例肺癌肿块存档石蜡标本中nm23基因表达及p53基因突变情况。发现nm23在肺癌组织中表达较高为38.7%，其阳性表达表现在早期和预后较好者，与病理类型无明显的相关，本组Ⅲa期者仅有2例表达，而阳性表达的有50%（5/10）生存超过5年。提示nm23的阳性表达与肺腺癌的期别、预后不良呈负相关。也符合该基因在肿瘤的发展和转移呈负相关的作用［5］；p53抑癌基因突变位点以第7、8外显子为主，突变率为48.86%。p53基因突变主要发生在细胞分化不良及肿瘤已发生转移的肺癌标本。本组31例标本中有p53第7外显子突变的病例有Ⅲa 5例，其中3例均于术后2年内死亡。本研究结果表明，p53突变与肺癌临床分期和预后不良呈正相关（P＜0.01）。结合以上结果可以看出，提示nm23表达和（或）p53基因突变在肿瘤形成、发展中是早期事件，对控制细胞的增殖、恶性细胞转化起作用。同时具有nm23表达和（或）p53基因突变是肺癌加速发展与否的信号，应引起临床重视，可作为判断肺癌恶性程度及进展情况的有价值的参考指标。所以开展nm23表达合并p53基因突变检测有助于筛选是否具有转移潜能的肺癌肿瘤，用于更准确地评估病人预后及转归，同时可指导手术后的整体治疗方案。肿瘤的发生是多基因协同作用的结果，nm23、p53基因的突变可能通过增加基因变异事件的积累而起作用，并影响着肿瘤发展。因此，只有对多种癌基因、抑癌基因及其他相关因素进行综合研究才能将我们对肿瘤发生、发展过程的认识提高到一个新阶段，本研究有助于肺癌肿瘤在分子水平上进行解释，其结果展示了癌相关基因研究的临床应用前景，并为今后发展转基因治疗提供了线索。

    ［参考文献］

    1  Itahana K，Dimri GP，Hara E，et al.A role for p53 in maintaining and establishing the quiescence growth arrest in human cells.J Biol Chem，2002，277（20）：18206-18214.

    2  Murdoch WJ，Van Kirk EA.Steroid hormonal regulation of proliferative，p53 tumor suppressor，and apoptotic responses of sheep ovarian surface epithelial cells.Mol Cell Endocrinol，2002，186（1）：61-67.

    3  Devita VT.Cancer principles and practice of oncology.Philadelphia： JB Lippincott Co，1989，98.

    4  Yamaguchi A，Urano T，Goi T，et al.Expreeion of nm23-H1 and nm23-H2 protein in hepatoocellular carcinoma.Cancer，1994，73：2280.

    5  毛伟敏，高永良，郑树.肿瘤转移相关基因表达与预后关系.浙江肿瘤，1997，3（1）：46-48.

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