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| 摘要 目的 探讨人类白细胞抗原DR等位基因在食管癌中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学技术ABC法和SP法分别检测40例食管癌及30例癌旁食管组织(癌旁正常组织)中HLA-DR抗原的表达情况及与临床病理特征的相关性。所有标本常规HE染色进行病理诊断。应用SPSS8.0统计分析软件包进行统计学处理。结果 ①食管癌组织中HLA-DR的阳性表达率分别为45%和53.3%,显著高于正常对照组(P<0.05)，且HLA-DR在食管上皮内癌中的表达显著高于侵袭性食管癌中的表达(P<0.05)。②HLA-DR在食管癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位淋巴转移、分化程度无相关性(P＞0.05)。结论 ①HLA-DR抗原表达与食管癌发生密切相关,可能是组织恶变的标志之一；②HLA-DR抗原表达能够防止肿瘤侵袭，影响患者的预后。 关键词 组织相溶性抗原 食管癌 免疫组织化学技术 Expression of HLA-DR antigen in esophageal cancer WU Jing1,2,MA Yanhua1,ZHAO Li1，et al (1 Departme-nt of Gastroenterology and Hepatology,First Teaching Hospital of Lanzhou Medical College;2 Lanzhou Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences,Lanzhou 730000 China) Abstract Objective To investigate the expression of the HLA-DR in esophageal cancer.Methods HLA-DR was examined in 40 patients with esophageal carcinoma,30 patients with gastric cardiac carcinoma and 30 normal co-ntrol subjects by immunohistochemistry technique (ABC) and relation ship between HLA-DR expression and clinic-opathologic characteristics were analyzed.All specimens were diagnosed through normal pathological process.Result The positive rate of HLA-DR in esophageal and gastric cardiac carcinoma were 45.0% and 53.3% respectively,which were significantly higher than 13.3% in normal controls(P＜0.05).The expression of HLA-DR in intraepithelial carc-inoma is significantly higher than that in invasive carcinoma(P＜0.05).No significant associations were found between patients with HLA-DR antigen and patients' age at presentation,sex,tumor site,invasive degree,lymph metastases and histological grading of tumors(P＞0.05).Conclusion HLA-DR expression is significantly associated with the inciden-ce of esophageal and gastric cardiac carcinoma.The HLA-DR expression may prevent tumor invasion similar to its role in intraepithelial carcinoma. Key words Histocompatibility antigens;Esophageal carcinoma; Immunohistochemistry technique 组织相溶性抗原（Histocompatibility antigens,HLA）是人的主要组织相溶性复合体，由一组具有高度多态性和连锁不均衡性的基因群体构成，位于人体第6号染色体短臂6P21.31,是迄今为止发现的最复杂的多态系统。HLA的主要生物学功能是参与抗原的加工、处理和免疫调控作用,并且与多种疾病的易感性和肿瘤的发生密切相关[1]。HLA分子不仅广泛分布于免疫系统T、B细胞,巨噬细胞，还分布于免疫细胞以外的不同组织，包括某些上皮来源的癌组织。HLA的主要生物学功能是参与抗原的加工、处理和免疫调控作用，因此抗原表达异常,可能使肿瘤逃避宿主的免疫监视,而得以浸润生长和转移。我们运用免疫组织化学技术对40例食管鳞状上皮细胞癌、30例癌旁食管组织进行HLA-DR检测,研究其与食管癌及其临床特征的相关性。 1 材料与方法 1.1 研究对象 选取兰州医学院第一附属医院病理科1997～今年间40例食管癌新鲜手术切除标本为实验组，其中男33例，女7例，年龄42～73(58.8±8.1)岁；高分化鳞癌11例，中分化鳞癌22例，低分化鳞癌7例。另取癌旁食管组织30例作为对照组，其中男26例，女4例；年龄43～72 (56.8±7.2)岁。所有标本诊断均经病理证实。 1.2 抗体及主要实验试剂 鼠抗人HLA-DR单克隆抗体购自北京中山生物技术公司；免疫组化ABC抗小鼠即用型试剂盒购自华美生物工程公司；S-P(兔)即用型试剂盒、DAB(3,3一二氨基联苯胺盐酸盐)显色剂、多聚赖氨酸、PBS(磷酸盐缓冲溶液)均购自福州迈新生物技术开发有限公司。 1.3 实验方法 手术标本常规经10%福尔马林固定,24h内取材，石蜡包埋，连续4μm切片，分别用于HE染色和免疫组织化学染色。 1.3.1 HE染色 石蜡切片干燥、脱蜡后苏木素染液染色5分钟，0.5%的盐酸酒精溶液分化5秒钟，pH为7～8的氨水冲洗30秒钟，0.5%的伊红复染2分钟，上述各步骤间均经自来水冲洗5～15分钟；然后脱水，透明，中性树脂封片，镜检。 1.3.2 免疫组化S-P法 石蜡切片常规脱蜡、水化，3%过氧化氢甲醇37℃孵育10分钟，非免疫动物血清室温下孵育10分钟，滴加兔抗Hp抗体湿盒内4～8℃冰箱过夜。加生物素化的羊抗兔IgG 37℃孵育10分钟，滴加链菌素—亲和素—过氧化物酶溶液37℃孵育10分钟。上述各步骤之间均经磷酸盐缓冲液(phoshate-buffer saline, PBS)充分扩洗3×5min，滴加底物液二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，每次染色时均用PBS代替一抗作为阴性对照。 1.3.3 免疫组化ABC法 石蜡切片常规脱蜡、水化，3％过氧化氢甲醇37℃封闭20min,加1%正常小牛血清37℃孵育30min，滴加鼠抗人HLA-DR单克隆抗体湿盒内4～8℃冰箱过夜，加生物素化的羊抗鼠IgG 37℃温育30min。上述各步骤之间均经磷酸缓冲夜(phaphote-baffer saline，PBS)充分冲洗3×5min，PBS洗后加底物液二氨基联苯胺显色，苏木素复染、脱水、透明、封片镜检，每次染色时均用已知的淋巴组织切片作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。 1.4 结果判断 食管癌细胞膜或胞浆呈现棕黄色染色判为阳性,癌细胞中被染成棕黄色的阳性细胞占5%以上者为阳性病例，否则为阴性。每张切片均经有经验的病理医师2人双盲法阅片,观察结果一致后决定阳性或阴性。根据胞膜或胞浆的染色程度及染色细胞的百分率分为：阴性(-)：无阳性细胞或小于5%；弱阳性（+）:阳性细胞百分率为5%～25%,胞膜或胞浆着色浅；阳性（++）：阳性细胞百分率为25%～50%，胞膜或胞浆着色较深；强阳性（+++）：阳性细胞百分率＞50%，胞质着色深。所有数据应用SPSS 8.0统计分析软件进行χ2检验。 2 结果 对照组(癌旁食管组织)HLA-DR的阳性表达率为13.3%(4/30)，食管癌组HLA-DR的阳性表达率为45.0%(18/40),对照组与食管癌组比较,具有显著性差异(P<0.05);侵及外膜的食管癌组织HLA-DR的阳性表达率为30.8%(10/26)，未侵及外膜的食管癌组织HLA的阳性表达率为71.4%(10/14)，二者差异有显著性(P<0.05)(见表1)。HLA-DR表达与患者的年龄、性别、肿瘤生长部位、淋巴转移及分化程度无明显相关性（见表2、图1～2）。 表1 HLA-DR在食管、贲门癌中的表达
*HLA-DR在食管癌中的表达与其浸润深度有关(P<0.05) |
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